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上世紀(jì)40年代，Draize試驗(yàn)在化妝品眼刺激性毒理評(píng)價(jià)方面發(fā)揮了重要作用，而后隨著動(dòng)物保護(hù)運(yùn)動(dòng)的開展、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的“3R”原則的提出以及法規(guī)的日益重視，易操作、具有科學(xué)性的動(dòng)物替代實(shí)驗(yàn)也廣受歡迎。根據(jù)《化妝品功效宣稱評(píng)價(jià)規(guī)范》，宣稱溫和（無刺激）可以通過實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、消費(fèi)者使用測試、人體功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)等方式，可以同時(shí)結(jié)合文獻(xiàn)資料或研究數(shù)據(jù)分析結(jié)果，進(jìn)行功效宣稱評(píng)價(jià)。

其中實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)有多個(gè)不同模型的測試方法，比如：

①雞胚模型，可進(jìn)行雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)（HET-CAM）、雞胚絨毛尿囊膜血管試驗(yàn)（CAMVA）、雞胚尿囊膜臺(tái)盼藍(lán)染色試驗(yàn) （TBS-CAM）；

②體外組織模型，較為常用的有牛角膜渾濁和滲透性試驗(yàn)、重建人體表皮模型體外測試；

③細(xì)胞模型，相關(guān)實(shí)驗(yàn)有短時(shí)間暴露試驗(yàn)（角膜細(xì)胞試驗(yàn)）、熒光素漏出試驗(yàn)、紅細(xì)胞溶血試驗(yàn)等。

其中，短時(shí)間暴露試驗(yàn)（角膜細(xì)胞試驗(yàn)）在2015年通過驗(yàn)證，并且是被經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織采納的眼刺激性替代方法。今天小編帶大家了解一下角膜細(xì)胞試驗(yàn)。

角膜細(xì)胞試驗(yàn)即使用細(xì)胞作為模型的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)中的短時(shí)間暴露試驗(yàn)。其采用的模型是SIRC細(xì)胞，是家兔眼角膜的上皮纖維細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)原理是化學(xué)物中的毒性物質(zhì)引起的角膜上皮損傷以及刺激反應(yīng)類似于細(xì)胞毒性對(duì)細(xì)胞的損傷作用。通過將化妝品原料、化學(xué)品在短時(shí)間內(nèi)直接作用于SIRC細(xì)胞上，反應(yīng)時(shí)間5min，最后通過計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)存活率來評(píng)估受試物的刺激性。

關(guān)于角膜細(xì)胞試驗(yàn)的方法有兩種，分別來自：

①《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2022的征求意見稿，第六章。

② SN/T 3084.2-2014進(jìn)出口化妝品眼刺激性試驗(yàn) 第2部分：角膜細(xì)胞試驗(yàn)方法。

方法有所不同，相應(yīng)的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。

①、在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2022的征求意見稿中：

在稀釋受試物時(shí)，一個(gè)受試物同時(shí)稀釋到5%和0.05%兩個(gè)濃度，溶劑為生理鹽水，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法測定細(xì)胞的吸光度，計(jì)算出相應(yīng)的細(xì)胞存活率。判斷標(biāo)準(zhǔn)：

②、根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T3084.2-2014進(jìn)出口化妝品眼刺激性試驗(yàn)第2部分：角膜細(xì)胞試驗(yàn)方法，在稀釋受試物時(shí)，統(tǒng)一稀釋到0.5%，溶劑使用PBS，作用5min后，使用MTT法或者CCK-8法測定細(xì)胞的吸光度，計(jì)算出相應(yīng)的細(xì)胞存活率。當(dāng)這一次實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)細(xì)胞存活率≤70%的情況，需要開始第二輪試驗(yàn)，受試物濃度不變與上一次實(shí)驗(yàn)相同，溶劑改用DMEM完全培養(yǎng)基，同樣方法測試，最后計(jì)算相對(duì)細(xì)胞存活率。判斷標(biāo)準(zhǔn)：

隨著“3R”原則被越來越多人所認(rèn)知以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代技術(shù)的成熟，體外動(dòng)物替代實(shí)驗(yàn)已是化妝品安全性評(píng)價(jià)發(fā)展的必然趨勢(shì)。相比動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，角膜細(xì)胞試驗(yàn)具有經(jīng)濟(jì)成本低、方法容易掌握、毒性終點(diǎn)易于測定、重復(fù)性好、靈敏度高、方法易標(biāo)準(zhǔn)化、材料容易獲取等優(yōu)點(diǎn)，是更適合化妝品企業(yè)內(nèi)部開展的“溫和（無刺激）”宣稱的實(shí)驗(yàn)室測試方法。

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